質量保證 :確保製備的病毒顆粒攜帶片段的正確性 ,病毒顆粒的總數和病毒顆粒的滴度達到要求
去除了病毒的關鍵蛋白 ,對人體安全 ;屬於複製缺陷型病毒 ,不會產生下一代病毒顆粒 ;已被改造為自身失活性,病毒轉導並整合到細胞後不再具有產生具有包裝能力的病毒基因組 。
穩定整合到細胞基因組 ,可用於製備多種穩定沉默特定基因的細胞株
1.客戶提供 :表達miRNA/shRNA的質粒(提供測序圖譜)或所要Knockdown的靶基因的名稱 、序列 ;所需要的病毒滴度及總量 ,病毒是否需要純化 ;若需要檢測靶基因的表達變化 ,如需要請提供相應的抗體
2.含目的基因的慢病毒RNAi幹擾載體的構建和純化提取 ;
3.慢病毒幹擾載體、pGag/Pol 、pRev 、pVSV-G四質粒共轉染293T細胞 ;
4.培養48~72h ,收集培養上清 ;
5.病毒的純化和濃縮 ;
6.滴度測定 、目的基因檢定
7.將製得的慢病毒液轉導客戶的靶細胞 ,篩選混合穩定細胞株 ,並檢測靶基因的表達 。
8.南宮娛樂提供 :提供重組後的慢病毒載體質粒 ,並附上PCR鑒定結果 ;提供已測定好滴度 、可以直接進行後續分析的慢病毒儲存液
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